ABSTRACT
Resumen Antecedentes: Las infecciones de transmisión sexual son un problema de salud pública mundial. El análisis rutinario incluye solo pruebas microbiológicas y serológicas para el diagnóstico de patógenos. Los microorganismos atípicos como Chlamydia trachomatis y micoplasmas no son identificados debido a los requerimientos. Además, no es incluida Gardnerella vaginalis, aunque se asocia a la vaginosis bacteriana. Objetivo: Desarrollar una PCR múltiplex para el diagnóstico de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis. Método: Se estandarizó la PCR múltiplex utilizando oligonucleótidos para C. trachomatis (gen ompA, orf6 plasmídico), Mycoplasma/Ureaplasma y G. vaginalis (genes rRNA16s). Resultados: Se estandarizaron pruebas de PCR múltiplex para los microorganismos estudiados, optimizándose las concentraciones y condiciones de las reacciones múltiplex. Se obtuvieron PCR dúplex para C. trachomatis (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella y Chlamydia/micoplasmas y tríplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma. También un cuádruplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma/Gardnerella. Los resultados fueron verificados por PCR e hibridación automática (HybriSpot 12) y análisis in silico. Conclusión: Se desarrollaron pruebas de PCR múltiplex con una alta sensibilidad y especificidad para la identificación de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis.
Abstract Background: Sexually transmitted infections are a global public health problem. Routine analysis includes microbiological and serological tests for the diagnosis of pathogens. Atypical microorganisms such as Chlamydia trachomatis and mycoplasmas are not determined due to the requirements for their identification. Furthermore, Gardnerella vaginalis is not included despite being associated with bacterial vaginosis. Objective: To develop a multiplex PCR to diagnose Chlamydia, mycoplasmas, and Gardnerella. Method: Standardization of multiplex PCR tests was carried out using oligonucleotides for the identification of Chlamydia (ompA gene, plasmid orf6), Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella (rRNA16s genes). Results: Multiplex PCR tests were standardized for the microorganisms studied, optimizing the concentrations and conditions of the multiplex reactions. Duplex PCR was obtained for Chlamydia (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella, and Chlamydia/mycoplasmas, and triplex PCR for Chlamydia/mycoplasmas. Also, a quadruplex for Chlamydia, Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella. PCR and automatic hybridization verified the results obtained (HybriSpot 12) and in silico analysis. Conclusion: Multiplex PCR tests with high sensitivity and specificity were developed to identify C. trachomatis, mycoplasmas, and G. vaginalis.
ABSTRACT
Introducción: la Chlamydia trachomatis es la principal causa de infecciones bacterianas de transmisión sexual a nivel mundial. Se estima que cada año se producen 131 millones de casos. Cursa de manera asintomática, pero la infección ascendente en mujeres puede conducir a la enfermedad inflamatoria pélvica, embarazo ectópico e infertilidad. Objetivo: determinar la prevalencia de C. trachomatis en mujeres de población abierta que acuden al Hospital General de Zona No. 29. Material y métodos: se realizó la identificación de C. trachomatis por pruebas de PCR a 200 muestras de exudado vaginal y se determinó su genotipo. Paralelamente, se realizó el diagnóstico microbiológico de rutina. Resultados: la prevalencia de C. trachomatis fue del 8.5% (17/200) con una concomitancia significativa de p = 0.006 con Gardnerella vaginalis (riesgo relativo de 2.871, IC95%: 1.574-5.236). Asimismo, se identificó C. trachomatis en cinco muestras como el único agente etiológico. Dieciséis cepas de C. trachomatis pertenecieron al genotipo F. Una cepa identificada de C. trachomatis presentó motivos genéticos similares a la variante mexicana reportada en 2019. Conclusiones: la prevalencia de C. trachomatis en la población estudiada nos indica la necesidad de implementar técnicas de diagnóstico para esta bacteria. El uso de la PCR permite realizar una determinación genotípica rápida, que explicaría el comportamiento epidemiológico de la C. trachomatis y representaría una mejora significativa de la calidad de vida de la paciente.
Background: Chlamydia trachomatis is the main cause of sexually transmitted bacterial infections worldwide. An estimated of 131 million cases occur each year. It is asymptomatic, but ascending infection in women can lead to pelvic inflammatory disease, ectopic pregnancy, and infertility. Objective: To determine the prevalence of C. trachomatis in open population women who attend the Hospital General de Zona No. 29. Material and methods: Identification of C. trachomatis was carried out by PCR testing of 200 vaginal exudate samples and its genotype was determined. In parallel, a routine microbiological diagnosis was carried out. Results: The prevalence of C. trachomatis was 8.5% (17/200) with a significant concomitance of p = 0.006 with Gardnerella vaginalis (relative risk of 2.871, 95%CI: 1.574- 5.236). Likewise, C. trachomatis was identified in 5 samples as the only etiological agent. Sixteen strains of C. trachomatis belong to genotype F. An identified strain of C. trachomatis presented genetic motifs similar to the Mexican variant repor- ted in 2019. Conclusions: The prevalence of C. trachomatis in the studied population indicates the need to implement diagnostic techniques for this bacterium. The use of PCR allows a rapid genotypic determination that would explain the epidemiological behavior of C. trachomatis and would represent a sig- nificant improvement in the quality of life of the patient.